Le CE biochimique rapide de réactif de la digestion 5-15 Min Enzyme BsaI d'ADN a approuvé

Enzymes BsaI

les enzymes sont des séries d'enzymes machinées de restriction pour la digestion rapide d'ADN en 5-15 enzymes mn peuvent être employées pour digérer les produits de plasmide, genomic et viraux d'ADN aussi bien que d'ACP. Toutes les enzymes montrent une activité supérieure dans le tampon universel, ainsi ont simplifié le système de réaction enzymatique de digestion. D'ailleurs, les enzymes fournit l'excellente redondance d'enzymes, permettant la digestion facile des calibres excédentaires ou difficiles de substrat.

Expédition et stockage

Les composants sont embarqués avec la vessie de glace et peuvent être stockés à -20°C pendant 2 années.

Coupure du site

5' - GGTCTC (N)1↓-3 '

3' - CCAGAG (N)5↑-5 '

États recommandés de réaction

Tampon de 1× FuniCut™ ; Incubez à 37℃.

Inactivation thermique

Incubation à 80℃ pendant 20 mn.

Contrôle de qualité

1. Définition d'activité : 1 ADN du μg pPIC9K a été complètement digérée avec 1 μL de l'enzyme en la minute 15 à 37℃ en volume total de réaction de μL 20.

2. Analyse prolongée d'activité d'incubation/étoile : Aucune dégradation décelable de 1 ADN du μg pPIC9K due à la contamination de nucléase ou à l'activité d'étoile ne s'est produite pendant l'incubation avec 1 μL de FuniCut™ BsaI pour 3 heures à 37℃. Une plus longue incubation peut avoir comme conséquence l'activité d'étoile.

3. Ligature et Recleavage (L/R) analyse : Après digéré avec de l'enzyme 1μL dans la condition optimale, réutilisez le produit de la digestion peut être ligaturé sous la ligase d'ADN T4 à 22℃. Le produit de ligature peut recleavaged par l'enzyme.

4. Activité non spécifique de ribonucléase : L'incubation de 1 enzyme de μL avec 1 ADN de plasmide supercoiled par μg pendant 4 heures à 37℃ a eu comme conséquence aucun changement de l'état supercoiled.

Instructions

1. Protocole pour la digestion rapide de l'ADN différente

1,1 cartel que les composants suivants de réaction sur la glace dans l'ordre ont indiqué :

[Note] : produits d'ACP épurés par *For. La quantité de tampon de 10× FuniCut™ peut être réduite au μL 2 dû à la concentration ionique restante dans les produits non épurés d'ACP. Le produit d'ACP a été recommandé pour être digestion antérieure épurée quand le produit d'ACP sera employé pour le clonage.

1,2 mélange doucement (faire pas le vortex) et rotation vers le bas.

1,3 incubez à 37℃ pour la minute 15 (ADN de plasmide) ou pour la minute 15-30 (produit d'ACP) ou pour la minute 30-60 (ADN genomic).

1,4 facultatif : Inactivez l'enzyme par la chauffage pour la minute 20 à 80℃.

2. Double et multiple digestion de l'ADN

2,1 employez 1 μL de chaque enzyme et mesurez les conditions de réaction convenablement.

2,2 le volume combiné des enzymes dans le mélange de la réaction ne devrait pas dépasser 1/10 de tout le volume de réaction.

2,3 si les enzymes exigent les différentes températures de réaction, le début avec de l'enzyme qui exige une plus basse température, alors ajoutent la deuxième enzyme et incubent à température élevée.

3. Mesurage vers le haut de la réaction de digestion d'ADN de plasmide

[Note] : Incubation dans un thermostat de l'eau, le thermostat en métal ou le thermostat de sable. Augmentez le temps d'incubation si tout le volume de réaction dépasse le μL 20.

Nombre de sites de reconnaissance en ADN